SRM972a維生素-D標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(美國(guó)NIST)旨在用作對(duì)確定人血清中維生素-D代謝物的物質(zhì)濃度的方法進(jìn)行嚴(yán)格評(píng)估的準(zhǔn)確度控制。SRM972a維生素-D標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)還可用作質(zhì)量保證工具，用于為這些成分的內(nèi)部控制材料分配值。SRM 972a由四個(gè)小瓶(1到4級(jí))冷凍血清組成，其中含有不同濃度的25-羥基維生素-D和24r，25-二羥基維生素-D3。

測(cè)量血清中的總25(OH)D濃度，即25-羥基維生素-D2和25-羥基維生素，D3[25(OH)D3]的總和，通常被認(rèn)為是維生素-D狀態(tài)的可靠指標(biāo).。3-環(huán)氧-25-羥基維生素-D3[3-epi-25(OH)D3]的濃度通常不包括在總25(OH)D中，但該代謝物對(duì)某些維生素-D代謝物測(cè)定構(gòu)成潛在的測(cè)量干擾24r，25-二羥基維生素-D3的測(cè)量血清中的含量被認(rèn)為是分解代謝的標(biāo)志物和腎臟疾病的指標(biāo)。每瓶SRM 972a含有大約1 mL血清。

SRM972a維生素-D標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(美國(guó)NIST)的四個(gè)水平中的每一個(gè)都以25(OH)D的特定目標(biāo)水平制備。雖然某些測(cè)量方法可能適用SRM 972a的四個(gè)級(jí)別中的每一個(gè)，但要認(rèn)識(shí)到某些方法可能不適用于某些級(jí)別。個(gè)人用戶將需要評(píng)估哪個(gè)級(jí)別或哪些級(jí)別極適合他們的特定需求。

SRM972a維生素-D標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(美國(guó)NIST)中 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3 濃度的賦值基于 NIST (ID) 兩種分析方法提供的結(jié)果的組合-LC-MS 和 ID-LC-MS/MS）以及來(lái)自 CDC 的兩個(gè) ID-LC-MS/MS 分析程序。 24R、25(OH)2D3 濃度的賦值基于 NIST 的 ID-LC-MS/MS 結(jié)果。通過(guò) ID-LC-MS (NIST) 測(cè)量 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3：血清 (450 mg) 和含有 2 H6-25( OH)D3、2 H3-25(OH)D2 和 2 H3-3-epi-25(OH)D3 在玻璃管中混合，沉淀蛋白質(zhì)，將代謝物萃取到己烷中兩次。合并己烷相并在氮?dú)庀略?0°C蒸發(fā)至干。殘留物用甲醇復(fù)溶，渦流混合。使用 LC-MS 和 (1) Ascentis Express F5 五氟苯丙基色譜柱 (Supelco, Bellefonte, PA) 和 (2) Zorbax SB-CN 氰丙基固定相色譜柱 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) 分析提取物。五氟苯丙基色譜柱的分析在等度流動(dòng)相為 26% 水和 74% 甲醇，流速為 0.8 mL/min。所有溶劑組成均以百分比表示體積分?jǐn)?shù)。柱溫保持在 15 °C。在運(yùn)行結(jié)束時(shí)將梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脫保留的基質(zhì)成分。在等度條件下對(duì)氰丙基色譜柱進(jìn)行分析，流動(dòng)相為 33% 水和 67% 甲醇（SRM 972a 的 1、2 和 4 級(jí)）或 34% 水和 66% 甲醇（3 級(jí)），流速為1.0 毫升/分鐘。在運(yùn)行結(jié)束時(shí)將梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脫保留的基質(zhì)成分。柱溫保持在 45 °C。

表1提供了25(OH)D3、25(OH)D2、3-epi-25(OH)D3和24r、25(OH)2D3的認(rèn)證值.認(rèn)證值是一個(gè)值對(duì)其準(zhǔn)確性的信心較高，因?yàn)樗幸阎蚩梢傻钠顏?lái)源都已被調(diào)查或考慮在內(nèi)[1]。認(rèn)證值25(OH)D3、25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3是基于同位素稀釋液相色譜質(zhì)譜(ID-LC-MS)[2]和同位素稀釋液的結(jié)果一致色譜串聯(lián)質(zhì)譜(ID-LC-MS/MS)[3]在NIST執(zhí)行的程序，以及在佐治亞州亞特蘭大的疾病控制和預(yù)防中心(CDC)執(zhí)行的兩種不同的ID-LC-MS/MS程序[4.5]。24r、25(OH)2D3的認(rèn)證值基于使用ID-LC-MS/MS進(jìn)行的參考測(cè)量程序的結(jié)果NIST[6]。NIST和CDCID-LC-MS/MS方法被檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)可追溯性聯(lián)合委員會(huì)(JCTLM)[7，8]認(rèn)定為高階參考測(cè)量程序。

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表2提供了25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的參考值。參考值是未經(jīng)認(rèn)證的值，是根據(jù)現(xiàn)有數(shù)據(jù)對(duì)真實(shí)值的優(yōu)良估計(jì);然而，這些值不符合NIST的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，并且提供了相關(guān)的不確定性，這些不確定性可能僅反映測(cè)量精度，可能不包括所有不確定性來(lái)源，或者可能反映多種分析方法之間缺乏足夠的統(tǒng)計(jì)一致性[1]。25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的參考值基于在NIST和ID-LC-執(zhí)行的ID-LC-MS和ID-LC-MS/MS程序結(jié)果的一致性。CDC提供的MS/MS.結(jié)果。

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